【試驗?zāi)康暮驮怼?/div>
ABO血型鑒定是通過檢測被檢者紅細(xì)胞上是否存在A和/或B抗原（正定型）以及被檢者血漿中是否存在抗A和/或抗B抗體（反定型）來確定。
對于成年個體被檢者，紅細(xì)胞上的A和/或B抗原與血漿中的抗A和/或抗B抗體存在一種對應(yīng)關(guān)系。其獨特性質(zhì)在于：紅細(xì)胞上缺乏A和/或B抗原，則血清中存在與所缺乏的抗原對應(yīng)的強(qiáng)反應(yīng)性抗體，如紅細(xì)胞上缺乏A抗原，則可以預(yù)見血漿中存在抗A抗體。
常規(guī)的ABO定型必須包括正定型（紅細(xì)胞定型）和反定型（血漿定型），并將正反定型結(jié)果相互驗證，如果紅細(xì)胞發(fā)生凝集，預(yù)期其凝集強(qiáng)度≥2+；只有正反定型結(jié)果一致時才能準(zhǔn)確定型。
然而，有時ABO正定型和反定型會出現(xiàn)結(jié)果不一致現(xiàn)象，或陽性反應(yīng)強(qiáng)度弱于2+。引起正反定型結(jié)果不一致因素有：
（一）正定型出現(xiàn)弱反應(yīng)或缺失抗原
1. A亞型、B亞型或AB亞型。
2. 白血病導(dǎo)致A或B抗原減弱。
3. 何杰金病（Hodgkin’s）有時會抑制抗原表達(dá)，與白血病類似。
4. 由于某種疾?。ㄈ绺骨话⒁认侔?dǎo)致血漿中存在大量的型物質(zhì)，中和抗A或抗B抗體，引起正定型為假陰性或弱陽性。需要將正定型的紅細(xì)胞用生理鹽水洗滌后再次定型可解決此問題。
5. 骨髓移植
6. 非ABO同型輸血
（二）正定型紅細(xì)胞上多余的抗原反應(yīng)
1. 自身凝集紅細(xì)胞、抗體致敏紅細(xì)胞導(dǎo)致。
2. 細(xì)胞未洗滌，血漿蛋白引起的假陽性反應(yīng)。
3. 細(xì)胞未洗滌，血漿中存在針對正定型試劑中某種成分的抗體導(dǎo)致。
4. 骨髓移植。
5. 獲得性B。
6. B（A）現(xiàn)象。
7. ABO非相合輸注。
（三）正定型出現(xiàn)混合視野反應(yīng)
1. 近期輸血。
2. 骨髓移植。
3. 異卵雙胞胎或雙受精卵產(chǎn)生的嵌合體。
4. 胎兒和母體出血。
5. A3亞型。
（四）反定型血清中出現(xiàn)弱反應(yīng)或反應(yīng)缺失
1. 年齡相關(guān)：新生兒以及小于6月齡的嬰兒以及老年人。
2. ABO亞型有亞型抗體，如A2、A2B型人的抗A1。
3. 低球蛋白血癥（如白血病人、使用免疫抑制劑患者、免疫缺陷患者）。
4. 移植患者使用抗排異藥物。
5. 雙胞胎或雙受精卵產(chǎn)生的嵌合體。
（五）反定型出現(xiàn)多余的抗體反應(yīng)
1. 冷自身抗體。
2. 特異性冷同種抗體。
3. 血清中存在針對試劑紅細(xì)胞保存液成分的抗體。
4. 某些疾病導(dǎo)致球蛋白水平增高（多發(fā)性骨髓瘤、巨球蛋白血癥、Hodgkin’s 淋巴瘤）引起緡錢狀凝集。
5. 輸用大分子血漿擴(kuò)容劑。
6. 非ABO同型的移植。
7. 靜脈注射免疫球蛋白。
（六）技術(shù)方面的錯誤
1. 血液樣本被污染，如混入其他人樣本。
2. 被檢紅細(xì)胞的濃度過高或過低。
3. 忘記在反應(yīng)體系中加入檢測樣本或試劑。
4. 未按照試劑使用說明進(jìn)行試驗。
5. 離心步驟離心時間不足或離心時間超時。
6. 對試驗結(jié)果記錄或判讀不正確。
為了解決ABO亞型引起的ABO正反定型不一致以及正定型紅細(xì)胞上抗原產(chǎn)生弱反應(yīng)或抗原反應(yīng)性缺失，可以使用ABO亞型定型卡來輔助血型鑒定。
ABO亞型定型卡系采用凝膠作為微柱凝膠卡的填充物，將生物化學(xué)的凝膠分子篩過濾技術(shù)、離心技術(shù)和血型血清學(xué)的抗體特異性結(jié)合在一起。每卡有八個凝膠管，其中抗A凝膠管灌注了含抗A抗體的凝膠；抗A1凝膠管灌注了含抗A1抗 體的凝膠；抗B凝膠管灌注了含抗B抗體的凝膠；抗AB凝膠管灌注了含抗AB抗體的凝膠；抗H凝膠管灌注了含抗H抗體的凝膠；A細(xì)胞、B細(xì)胞及Ctl管中灌 注了不含血型抗體的凝膠，A細(xì)胞、B細(xì)胞用于檢測血漿中的抗體，Ctl管用于自身對照。當(dāng)抗原抗體反應(yīng)時，凝集的紅細(xì)胞在離心力的作用下不能通過凝膠而留 在凝膠上層或游離在凝膠中，呈現(xiàn)陽性反應(yīng)；而抗原抗體沒有反應(yīng)時，未凝集的紅細(xì)胞在離心力的作用下可通過凝膠而沉積在微柱凝膠管的底部，呈現(xiàn)陰性反應(yīng)。
【ABO亞型定型卡的用途】
鑒定紅細(xì)胞上的ABO抗原，解決亞型引起ABO正反定型不一致、以及正定型紅細(xì)胞上抗原產(chǎn)生弱反應(yīng)或抗原反應(yīng)性缺失的問題。
【樣本要求】
1. 建議使用抗凝的血樣，尤其是EDTA抗凝管采集的血樣，需要量2ml。（EDTA抗凝采血管為紫帽管）。
2. 血液樣本在采集后48小時以內(nèi)檢測。
【所需儀器設(shè)備及耗材】
1. ABO亞型定型卡
2. 血型血清學(xué)離心機(jī)（用于離心分離血漿、洗滌紅細(xì)胞）
3. 微柱凝膠卡離心機(jī)
4. 微量移液槍及吸頭
【試驗操作】
一、被檢血液樣本的處理
1. EDTA抗凝的血液樣本離心3000rpm 1分鐘，將上清血漿轉(zhuǎn)入一支12×75mm試管中備用，得到壓積紅細(xì)胞。
2. 另取一支12×75mm試管中，加入0.1ml上述步驟1中的壓積紅細(xì)胞 ，用生理鹽水洗滌一次，棄上清，得到壓積紅細(xì)胞。
3. 在一支12×75mm 試管中，加入1ml生理鹽水（或LISS液），加入步驟2中得到的壓積紅細(xì)胞10μl，混勻得到0.8~1%的被檢紅細(xì)胞懸液。
二、 紅細(xì)胞定型
1. 取ABO亞型定型卡一片，注意檢查外觀，確保凝膠管的凝膠上層存在液面，凝膠不會干枯。將符合要求的卡進(jìn)行標(biāo)記，按照試驗需要撕開封口膜。
2. 用微量移液槍分別向每孔樣品槽中沿樣品槽內(nèi)壁呈45°角緩慢加入50μl 0.8~1%的被檢者紅細(xì)胞懸液。
3. 在臺面交替輕叩卡左下角和右下角，確保所加入的液體在卡的樣品槽中呈水平狀態(tài)，而不是偏向一側(cè)。
4. 將卡放入微柱凝膠卡離心機(jī)離心，LB-3000低速離心機(jī)一檔離心900rpm 2分鐘，再1500rpm 3分鐘，判讀結(jié)果并記錄。
【結(jié)果判讀及解釋】
1. 反應(yīng)陰、陽性的判讀
2. 陰陽性結(jié)果解釋
(1) 陽性結(jié)果：紅細(xì)胞浮在凝膠表面或膠中，為陽性反應(yīng)。
(2) 陰性結(jié)果：紅細(xì)胞全部沉于微柱凝膠的底部。
(3) 血型亞型鑒定需要根據(jù)正反定型結(jié)果來判定，結(jié)果判定可參考下表。
注：mf=混合視野，w=弱反應(yīng)。
【注意事項】
1. 建議在使用凝膠卡前先離心再應(yīng)用。
2. 若凝膠卡封口開裂、孔中凝膠干涸或有氣泡，不可使用。
3. 撕開凝膠卡封口膜時，不能用力過猛，以免造成凝膠微孔間的交叉污染。
4. 樣本采集后應(yīng)盡快檢測，若試驗需要延遲，應(yīng)將樣本置2~8℃下短期儲存。
5. 紅細(xì)胞懸液的濃度為0.8~1%，濃度過高或過低會影響檢測結(jié)果。
6. 溶血、脂血、細(xì)菌污染等情況的標(biāo)本會影響檢測結(jié)果。
7. 血漿或血清標(biāo)本須充分離心去除纖維蛋白，否則會阻止紅細(xì)胞在微柱凝膠中的沉降，出現(xiàn)假陽性。
8. 在Ctl孔（自身陰性對照）結(jié)果為陽性時，試驗結(jié)果無效?？赡茉蚴怯捎诒粰z紅細(xì)胞已經(jīng)致敏IgM抗體導(dǎo)致自發(fā)凝集，此時可以用DTT將已經(jīng)致敏到紅細(xì)胞上的IgM抗體破壞后再行試驗。
9. 人源血液樣本存在潛在的傳染性，凝膠卡使用后按醫(yī)療生物垃圾處理。
